Марио, скорее всего, родился в Монтериджиони, Тоскане, вместе со своим младшим братом Джованни. Марио произошел из рода ассасинов и таким образом стал одним из них, начав свои тренировки ещё в раннем возрасте.

В 1454 году, младший брат Марио, Джованни решил переехать во Флоренцию, чтобы продолжить свою карьеру в банковской сфере. Марио остался на вилле семьи Аудиторе в Монтериджиони и братья обменивались письмами, чтобы оставаться на связи. В одном из этих писем Марио отстаивал своё решение остаться в Монтериджиони, написав, что он "предпочитает борьбу". Он не раз намекал, что очень редко видит семью, в том числе своего брата.

Во время правления Марио, Монтериджиони начал процветать. Марио открыл несколько магазинов и гильдий в городе и значительно усилил его оборону для того, чтобы противостоять атакам. Он обнаружил флорентийского информатора, живущего в Монтериджиони, Лучано Пезатти и его людей, некоторые из которых были на подчинении у самого Марио. Марио сражается с Лучано и, едва победив его, оттаскивает его на виллу. От Лучано он узнал, что из Флоренции был отправлен кандотьер Федерико да Монтефельтро для того, что бы провести нападение на Монтериджиони. Войсками командовал Марио, поэтому город был успешно защищён и атака не удалась.

В конце концов, Лучано Пезатти рассказал о истинной цели атакующих, флорентийцы искали таинственный артефакт, спрятанный в Монтериджиони. Марио было любопытно, поэтому он собрал своих архитекторов и историков, и в конце концов обнаружил, что в городе также были когда-то проведены раскопки. Вместе с шахтером и некоторыми из его людей, он ступил внутрь шахты. Хотя сначала они ничего не нашли, вскоре Марио увидел, что пламя мерцало и колебалось у задней стены, что указывало на наличие ветра. Вместе они толкнули стену и обнаружил скрытый коридор, наполненный опасными ловушками. Многие из группы погибли, и даже самого Марио зацепил маятник, оставив его без левого глаза.

Наконец, они обнаружили деревянный сундук в яме, из присутствовавшим при этом Марио сказал, что их "боль была временной" и "Не обращайте внимания." люди Марио были уверены, что таинственный артефакт вылечит их раны, но Марио решил, что, раз сундук был спрятан так далеко, на то должны были быть веские причины, то открывать его было бы не разумно. Люди Марио восстали, желая, заглянуть внутрь находки, и он был вынужден ударить их. Марио и самому было любопытно, что может скрываться внутри, но он дал себе слово никогда не открывать таинственный сундук. Он принёс находку к вилле Аудиторе, и спрятал её там.

В 1476 году Джованни и двое его сыновей, Федерико и Петруччо, были казнены за то, что их обвиняли в государственной измене, в то время тайно выполняя приказ тамплиеров, заклятых врагов ассасинов. Для того, чтобы укрыться в безопасности, сын Джованни — Эцио сопровождает свою мать Марию и сестру Клаудию из Флоренции в Монтериджиони.

Когда тройка почти достигла Монтериджиони, они попали в засаду Вьери Пацци и его солдат. Марио и его наемники спасли трио, и он настоял, чтобы они сопровождали его обратно в Монтериджиони. Марио сказал Эцио, что он потомтсвенный ассасин и что он должен быть обучен, чтобы мог бороться и смог победить тамплиеров, защитить своих мать и сестру. Затем он показал Эцио святилище, спрятанное за шкафом и объяснил смысл Кодекса. Вскоре он начал подготовку Эцио к становлению ассасином и сильно разозлился после того как Эцио объявил о своем решении спрятать Марию и Клаудию в Испании, против воли Марио.

Чувствуя вину, Эцио пересмотрел свое решение и пошел с Марио в Сан-Джиминьяно, чтобы убить Вьери Пацци. Когда Эцио убил Вьери и начал яростно колотить тело, Марио призвал его уважать мертвых. "Ты не Вьери," сказал он Эцио. "Не становись похожим на него". Затем, обращаясь к телу Вьери, он произнес слова "Requiescat in pace (покойся с миром)"

В 1488 Марио и некоторые другие ассасины встретились в Венеции, чтобы найти "Яблоко" раньше Великого Магистра Тамплиеров, Родриго Борджиа, зная, что оно должно было быть доставлено к нему в этот день. Когда они прибыли на место, они обнаружили, что Эцио сражается с Родриго и поспешили на помощь. После победы над гвардией Родриго они почти убили Родриго. Однако, он сбежал, оставив Яблоко ассасинам. Люди, в том числе и Марио, сказали, что они тоже ассасины, как и сам Эцио.

Вскоре Марио, Эцио, Николо Макиавелли и Леонардо да Винчи уже изучали Яблоко. Когда оно было активировано, Марио и Макиавелли нагнулись, закрыв уши. Эцио и Леонардо, однако, остались стоять. Марио попросил Эцио сопроводить Макиавелли в Форли. А затем предложил Леонардо перебраться на Виллу Аудиторе в Монтериджиони.

Увидев как Эцио принёс очередное перо в комнату Марии, Марио вошел и попытался остановить его и сказал, что он считает напрасными усилия Эцио и после этого сказал ему о том, что он оставил новое оружие у кузнеца и что Эцио может его использовать.

В 1499 году Марио, Эцио и несколько других ассасинов, с которыми Эцио встречался раньше, собрались на вилле Аудиторе, чтобы узнать пророчество из Кодекса. Они выяснили, что страницы Кодекса показывают карту всех сокровищниц мира. Эцио пришёл к выводу, что ближайшей сокровищницей была сокровищница в Ватикане и что Родриго Борджиа стал Папой, чтобы получить доступ к ней и второй части Эдема, которая была на самом деле папским посохом. Эцио отправился в Рим, чтобы убить Родриго и войти в сокровищницу. Однако, Эцио в конечном итоге пощадил Родриго.

После разговора Эцио с представительницей древней цивилизации, он встречается с Марио и те бок о бок с боем пробираются через Ватикан, возвращаются из Рима в Монтериджиони. Вскоре после того как они вернулись, Монтериджиони был осажден войсками Борджиа, под командованием Чезаре, сына Родриго Борджиа. Марио быстро нашёл Эцио, и сказал, что он спрячет Яблоко в безопасном месте и что Эцио должен остановить противника. Однако, Марио получил ранение и был схвачен Чезаре. Марио привели обратно в город, и заставили упасть на колени. Чезаре, держа Яблоко в руке, выстрелил в обессиленного Марио.